Përmbajtje:

Si i zgjidhni klonet?
Si i zgjidhni klonet?

Video: Si i zgjidhni klonet?

Video: Si i zgjidhni klonet?
Video: Настоящий конструктор от Дэволт! Ремонт болгарки DeWALT - подробно! 2024, Nëntor
Anonim

Kur duke zgjedhur a klon , sigurohuni që rrënjët të jenë të forta, të bardha dhe të dala me padurim nga mjedisi i rritjes. Nëse rrënjët janë kafe dhe të rrudhura, ose përndryshe duken joaktive, vendoseni përsëri dhe kërkoni një më të mirë.

Përveç kësaj, si e klononi një qelizë të vetme?

  1. Numëroni qelizat në mënyrë që të vendosni ~16,000 qeliza në pusin e parë (A1) të një pllake me 96 puse që përmban 200 µL medium.
  2. Hiqni 100 µL nga qelizat që përmbajnë A1 dhe përziejeni me B1, duke nxjerrë me pipetë lart e poshtë 3 herë për t'u përzier mirë përpara se të hiqni 100 µL dhe ta përzieni me C1, etj.

Gjithashtu, si e zgjidhni një koloni të qelizave të gjitarëve? Vendoseni pjatën nën mikroskop për të zgjedhur të shëndetshëm të padiferencuar kolonitë . Zgjidh kolonitë duke përdorur një pipetë P-20 të vendosur në 10ul. Me kujdes zgjedh a koloni pa e prishur koloni në beqare qelizat , dhe transferojeni në një pjatë 96 pusesh me tripsinë. Hidhni pipetë lart e poshtë disa herë për të shpërndarë koloni.

Përkatësisht, si e përdorni një cilindër kloni?

Duke përdorur pincë mesatare sterile, marr a cilindër klonimi . Shtypni butësisht pjesën e poshtme të sheshtë të cilindër në yndyrën e lëmuar të silikonit dhe hiqeni me një lëvizje të papritur vertikale. Nëse bëhet siç duhet, kjo do të japë shpërndarje të barabartë të yndyrës në pjesën e poshtme të cilindër . Vendos cilindër mbi një koloni.

Si i zgjidhni kolonitë për linja qelizore të qëndrueshme?

Protokolli për gjenerimin e linjave qelizore të qëndrueshme kërkon disa hapa siç tregohet më poshtë:

  1. Gjeneroni një kurbë vrasëse për të përcaktuar përqendrimin optimal të antibiotikut të përzgjedhjes.
  2. Transfektoni qelizat me konstruktin(et) e dëshiruar të plazmidit
  3. Zgjidhni dhe zgjeroni kolonitë e qëndrueshme poliklonale.
  4. Identifikoni klone të vetme me hollim dhe zgjerim të kufizuar.

Recommended: