Çfarë ndodh nëse shtoni shumë enzimë kufizuese?
Çfarë ndodh nëse shtoni shumë enzimë kufizuese?

Video: Çfarë ndodh nëse shtoni shumë enzimë kufizuese?

Video: Çfarë ndodh nëse shtoni shumë enzimë kufizuese?
Video: My Friend Irma: Buy or Sell / Election Connection / The Big Secret 2024, Dhjetor
Anonim

Mund të ndodhë tretje jo e plotë kur shumë ose gjithashtu pak enzimë përdoret. Të prania e ndotësve në të Mostra e ADN-së mund pengoj enzimat , duke rezultuar gjithashtu në tretje jo të plotë. Disa enzimat kufizuese kërkojnë kofaktorë për aktivitet të plotë.

Përveç kësaj, pse enzimat kufizuese shtohen të fundit?

Të enzimë kufizuese është zakonisht e fundit komponent shtuar ndaj një reagimi për të siguruar që të mos ekspozohet ndaj kushteve ekstreme. Reagimi i mbledhur duhet të përzihet më pas enzimë shtesë. Përzieni të gjitha tretësirat që përmbajnë enzimat kufizuese butësisht për të shmangur enzimë inaktivizimi.

Për më tepër, si mund të përmirësohet tretja e enzimave kufizuese? Përdorni jo më shumë se sa rekomandohet enzimë shuma (p.sh., 10 njësi të enzimë për mikrogram ADN). Zvogëloni sasinë e enzimë në reagim, nëse është e nevojshme. Shmangni inkubimin e zgjatur të tretje reagimi. Përdorni buferin e rekomanduar të reagimit.

Dije gjithashtu, pse një enzimë kufizuese nuk do të shkurtohej?

Përgatitja e ADN-së që do të copëtohet duhet të jetë pa ndotës të tillë si fenoli, kloroformi, alkooli, EDTA, detergjentët ose kripërat e tepërta, të cilat të gjitha mund të ndërhyjnë në enzimë kufizuese aktivitet. Nëse një frenues (shpesh kripë, EDTA ose fenol) është i pranishëm, ADN-ja e kontrollit do jo i prerë pas përzierjes.

Pse sasia e enzimës mund të shkaktojë aktivitetin e yjeve?

Aktiviteti i yjeve është relaksimi ose ndryshimi i specifikës së kufizimit enzimë ndarje e ndërmjetësuar e ADN-së që mund ndodhin në kushte reagimi që ndryshojnë ndjeshëm nga ato optimale për enzimë . Aktiviteti i yjeve mund të ndodh për shkak të pranisë së Mg2+, si është shihet në HindIII, për shembull.

Recommended: