Përmbajtje:

Pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR përpara sekuencës?
Pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR përpara sekuencës?

Video: Pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR përpara sekuencës?

Video: Pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR përpara sekuencës?
Video: Coronavirüs hakkında en çok merak edilen sorular! 2024, Nëntor
Anonim

Verifikimi i dëshirës produkt është thelbësore , e cila përfshin konfirmimin e mungesës së jospecifike produkteve dhe dimerët e primerit. I pastër -lart e përzierjes së reaksionit është gjithashtu e nevojshme për të hequr primerët e papërfshirë dhe dNTP që mund të ndërhyjnë në reaksionet pasuese dhe të çojnë në një sekuencë të palexueshme.

Përveç kësaj, pse është i nevojshëm pastrimi i produkteve PCR?

Ju duhet të pastroni produktet PCR për të hequr qafe primerët, nukleotidet dhe enzimat e papërdorura në mënyrë që të optimizohet suksesi i lidhjes, i cili do të ruajë dhe renditë produkt e PCR . te pastroj të Produktet PCR , përdoret kromatografia me përjashtim të madhësisë.

Dikush mund të pyesë gjithashtu, a duhet të pastroni produktet PCR përpara tretjes së endonukleazës kufizuese? Shumica e kufizim enzimat janë aktive në PCR tamponat. Për aplikimet e klonimit, pastrimi e Produktet PCR para tretjes është e nevojshme për të hequr polimerazën e ADN-së termofilike aktive të pranishme në PCR përzierje. Polimerazat e ADN-së mund të ndryshojnë skajet e ADN-së së copëtuar dhe të zvogëlojnë rendimentin e lidhjes.

Njerëzit pyesin gjithashtu, si i përgatisni produktet PCR për sekuencë?

Sekuenca e drejtpërdrejtë e produkteve PCR

  1. Sigurohuni që të keni përforcuar fragmentin e duhur.
  2. Duhet të hiqni të gjithë primerët e mbetur të PCR dhe nukleotidet e pa inkorporuara.
  3. Nëse primerët PCR do të jenë gjithashtu primerët e renditjes, sigurohuni që ato përputhen me kushtet tona.
  4. Mos e mbikoncentroni mostrën!

A mund të renditni produktin PCR?

Direkt Sekuenca e Produkte PCR . Renditja përdor vetëm një abetare në vend të dy të përdorura në PCR . Nëse ju bëni mos i hiqni të dy abetaret, ju do merrni dy sekuencat të mbivendosura njëra mbi tjetrën që nuk janë të lexueshme. Është në rregull të përdoret a PCR abetare për renditjen e renditjes për sa kohë që përputhet me kushtet tona.

Recommended: